阿膠肽圖前處理膠原蛋白酶解條件研究
作者：童芯鋅; 葉茂; 張涵; 白靜; 國錦琳 成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗室; 四川成都611137; 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗室培育基地; 四川成都611137
摘要：目的：建立標(biāo)準(zhǔn)化的阿膠蛋白酶解條件。方法：分別通過加熱法、超聲法及液氮碾磨法提取阿膠蛋白;通過二氯甲烷-環(huán)己烷萃取和超濾法純化阿膠蛋白;采用序列分析級胰酶進(jìn)行酶解,分別考察4個酶解參數(shù)（溫度、時間、酶的劑量和pH值）對酶解結(jié)果的影響,通過Tricine-SDS-PAGE法檢測酶解效果。結(jié)果：超聲法溶解阿膠樣品效果相對較好,酶解參數(shù)最佳條件為：酶解溫度38℃,pH 8.0,酶解時間12 h以上,底物與酶體積比在4：1-1：1范圍內(nèi),計算酶活為0.1-0.4 mU（mg/μmol）。結(jié)論：建立了標(biāo)準(zhǔn)化的阿膠肽圖前處理膠原蛋白胰酶酶解條件,為基于肽圖譜法阿膠鑒別及質(zhì)量控制方法的建立打下基礎(chǔ)。
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成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報雜志
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