摘要：以喜樹內(nèi)生菌為研究對(duì)象,經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后提取喜樹堿及其衍生物,采用HPLC法對(duì)發(fā)酵液中喜樹堿及其衍生物進(jìn)行定性檢測(cè),獲得能夠產(chǎn)生喜樹堿(CPT)及10-羥基喜樹堿(HCPT)的喜樹內(nèi)生菌。通過對(duì)喜樹堿生物合成途徑的研究,選取10-羥基香葉醇羥化酶(G10H)、10-羥基香葉醇脫氫酶(HGO)、色氨酸脫羧酶(TDC)和異胡豆苷合酶(STR)4個(gè)關(guān)鍵酶基因作為研究對(duì)象,設(shè)計(jì)特異性引物,克隆目的基因。提取喜樹RNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,同時(shí)提取喜樹內(nèi)生菌DNA。分別以植物cDNA和內(nèi)生菌DNA作為模板,篩選鑒定喜樹堿合成途徑的關(guān)鍵酶基因G10H、HGO、TDC和STR并與喜樹關(guān)鍵酶基因進(jìn)行比較,初步解析喜樹堿代謝途徑,為喜樹內(nèi)生菌發(fā)酵合成喜樹堿及其衍生物提供理論依據(jù)。