摘要:目的建立人主動(dòng)脈夾層(AD)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)體外培養(yǎng)的方法。方法以AD患者手術(shù)時(shí)切除的血管為原料,用組織塊貼壁法進(jìn)行VSMC的體外原代和傳代培養(yǎng),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,考馬斯亮藍(lán)染色、α-SMA及Ⅷ因子免疫熒光染色和透射電鏡檢測(cè)鑒定細(xì)胞。結(jié)果7~10d原代細(xì)胞從組織塊邊緣遷移出來(lái),3~4周細(xì)胞生長(zhǎng)至融合,可進(jìn)行傳代。原代和傳代的細(xì)胞生長(zhǎng)良好,倒置顯微鏡下見(jiàn)細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形,有多個(gè)突起。細(xì)胞呈"峰谷狀"生長(zhǎng),具有典型的VSMC特征??捡R斯亮藍(lán)染色和透射電鏡下均可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)有大量沿長(zhǎng)軸生長(zhǎng)的肌絲,α-SMA免疫熒光染色強(qiáng)陽(yáng)性,Ⅷ因子免疫熒光染色陰性,證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為VSMC。細(xì)胞傳代至第6代以后開(kāi)始出現(xiàn)老化現(xiàn)象。結(jié)論應(yīng)用組織塊貼壁培養(yǎng)的方法可成功地在體外培養(yǎng)人AD的VSMC,為今后研究AD的發(fā)病機(jī)制提供良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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