牛FOXM1基因特異性siRNA干擾效率的分析
作者：王超; 張淑琴; 宋雪瑩; 王改麗; 孫娜; 郭利; 程世鵬 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所/農(nóng)業(yè)部經(jīng)濟(jì)動(dòng)物疫病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/特種動(dòng)物分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 長春130112; 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院; 黑龍江齊齊哈爾160006; 吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院; 長春130062
摘要：為了篩選到有效干擾牛叉頭框M1(forkhead box M1,FOXM1)基因特異性siRNA,試驗(yàn)設(shè)計(jì)并合成3個(gè)靶向干擾牛FOXM1的5-羧基熒光素(FAM)標(biāo)記siRNA,對siRNA轉(zhuǎn)染劑量進(jìn)行優(yōu)化,篩選出干擾效果較好的siRNA,并檢測干擾FOXM1后MDBK細(xì)胞中LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明:siRNA的最佳轉(zhuǎn)染劑量為1.5μL(20μmol/L),3個(gè)特異性siRNA的干擾效率分別為34.2%、52.0%及72.5%,干擾牛FOXM1基因效果最好的siRNA是siRNA-929,它能夠阻止細(xì)胞中LC3-Ⅰ型向LC3-Ⅱ型的轉(zhuǎn)化,使自噬過程受到抑制。說明試驗(yàn)成功篩選到干擾牛FOXM1基因的特異性siRNA。
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