人胱抑素C大腸桿菌表達(dá)載體構(gòu)建及包涵體復(fù)性研究
摘要：構(gòu)建大腸桿菌(E.coli)人胱抑素C基因(cysC)表達(dá)載體,并探究包涵體胞外復(fù)性方法.方法:將人胱抑素C基因克隆至原核表達(dá)載體pET32a上,電擊轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21菌株中. IPTG誘導(dǎo)cysC表達(dá),超聲破碎后采用SDS-PAGE電泳檢測(cè)CysC蛋白表達(dá)情況,并應(yīng)用親和層析和透析復(fù)性方法對(duì)CysC蛋白進(jìn)行純化和復(fù)性.結(jié)果:IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)重組菌BL21-cysC,可見沉淀和上清中均有pET32a-cysC蛋白表達(dá),且沉淀中表達(dá)量更高.采用鎳柱及透析方法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化,經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè),可見分子量約34kD大小的蛋白條帶. Western Blotting檢測(cè)顯示經(jīng)純化、復(fù)性后的重組CysC蛋白具有一定免疫學(xué)活性.結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建大腸桿菌cysC表達(dá)重組工程菌,經(jīng)純化、復(fù)性得到的重組CysC蛋白具有一定免疫活性.
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惠州學(xué)院學(xué)報(bào)雜志
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