百脈根泛素結(jié)合酶LjE2的表達(dá)及活性鑒定
作者：劉超; 馮勇; 董笑笑; 張忠明; 朱輝 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院/農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點實驗室; 武漢430070
摘要：為了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮過程中的調(diào)控功能和作用機(jī)制,利用擬南芥泛素結(jié)合酶E2的序列,在百脈根基因組上鑒定得到14個編碼E2(LjE2)的基因,從LjE2中克隆到11個基因并構(gòu)建了融合表達(dá)載體pET-LjE2s:His。通過大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),表達(dá)并純化到10個LjE2:His融合蛋白。經(jīng)體外泛素化及Western blot分析,在10個LjE2中有9個具有泛素結(jié)合酶活性,1個(LjE2-5)未檢測到泛素結(jié)合酶活性。
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