摘要：鯉浮腫病毒(Carp Edema Virus,CEV)和錦鯉皰疹病毒(Kio Herpes Virus,KHV)皆可感染錦鯉,對錦鯉養(yǎng)殖造成嚴(yán)重危害。本研究旨在建立一種可同時(shí)檢測CEV和KHV的三重PCR檢測方法。參考日本學(xué)者Oyamatsu等建立的nest-PCR方法和錦鯉皰疹病毒行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SC/T 7212.1—2011《鯉皰疹病毒檢測方法第1部分:錦鯉皰疹病毒》,分別選取擴(kuò)增CEV P4a基因的548 bp片段,KHV TK基因的409 bp片段和KHV Sph基因的292 bp片段的3對特異性引物進(jìn)行組合,考慮多重PCR擴(kuò)增過程中的影響因素,優(yōu)化退火溫度和引物濃度,進(jìn)行敏感性和特異性試驗(yàn)。結(jié)果顯示,該方法能特異地?cái)U(kuò)增出3條目的條帶,大小分別是548 bp、409 bp和292 bp,最佳退火溫度為53℃,引物濃度均為0.3μmol/L。該方法對CEV和KHV的檢測限均為300 copies/μL,同時(shí)與其他水生動(dòng)物病毒均無交叉反應(yīng)。因此,本研究建立的方法可用于錦鯉樣品中CEV和KHV的快速檢測。