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谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶在Yarrowia lipolytica中的活性表達

作者:任蕊蕊; 劉松; 李江華; 堵國成; 陳堅 江南大學(xué)生物工程學(xué)院; 無錫214122; 江南大學(xué)工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室; 無錫214122

摘要:谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(EC2.3.2.13, Transglutaminase, TGase)是一種重要的食品酶?;贜-端酶原區(qū)對折疊的重要影響,TGase通常以無活性的酶原(pro-TGase)形式在異源宿主中表達。以茂源鏈霉菌( Streptomyces mobaraensis )pro-TGase為基因來源,重組解脂耶氏酵母( Yarrowia lipolytica po1h)為研究對象,通過在pro-TGase插入宿主Kex2蛋白酶識別位點(策略1)和共表達pro-TGase與谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶激活金屬蛋白酶(TAMEP,策略2),使pro-TGase在 Y. lipolytica 中表達后被切除酶原區(qū),而直接轉(zhuǎn)化為活性TGase。搖瓶發(fā)酵結(jié)果顯示,策略1和策略2構(gòu)建得到的重組菌的TGase活力分別為5.26 U/mL和6.77 U/mL。酶學(xué)性質(zhì)研究表明,策略1和策略2得到的重組菌的TGase比酶活、 Km及k cat / Km 均明顯優(yōu)于 S. mobaraensis TGase?;?Y. lipolytica 食品安全性,研究結(jié)果為TGase的工業(yè)化生產(chǎn)提供了新型高產(chǎn)菌種。

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