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摘要：為篩選和驗證遼寧絨山羊粗型和細型個體羊絨細度相關候選基因ALX4、NT-3、POLD2和AKT1表達調控潛在靶標miRNAs及其表達差異,提取遼寧絨山羊細型和粗型皮膚組織DNA和RNA,先采集遼寧絨山羊粗型和細型肩胛部皮膚組織,根據(jù)NCBI上的序列克隆獲得ALX4、NT-3、POLD2和AKT1基因的3'UTR,利用Primer5.0設計并合成功能引物,通過常規(guī)PCR擴增ALX4、NT-3、POLD2和AKT1基因的3'UTR序列,在miRBase數(shù)據(jù)庫中,篩選羊絨細度候選靶基因3'UTR靶標miRNAs,然后與遼寧絨山羊(LCG)和內蒙古絨山羊(MCG)品種間皮膚miRNAs高通量測序結果共聚焦,篩選和驗證羊絨細度相關候選基因表達調控潛在靶標miRNAs,在NCBI中檢索到miRNAs的前體序列,應用RNAfold獲得二級結構圖及勢能圖,通過qPCR驗證細型遼寧絨山羊(FinetypeLCG)和粗型遼寧絨山羊(CoarsetypeLCG)皮膚組織中羊絨細度候選基因ALX4、NT-3、POLD2和AKT1靶標miRNAs的表達量。結果表明:通過miRBase數(shù)據(jù)庫預測,羊絨細度候選基因ALX4、NT-3、POLD2和AKT1分別獲得104,27,19和32個靶標miRNAs,與絨山羊品種間皮膚miRNAs高通量測序結果聚焦分析,ALX4基因聚焦到3個靶標miR-m13,miR-433-5p和miR-671,其表達量是56,2和27;NT-3基因聚焦到1個靶標miR-1296,表達量是41;POLD2基因聚焦到1個靶標miR-130b,表達量是177;AKT1基因聚焦到2個靶標miR-345-3p和miR-2331-3p,其表達量是52和5。其中前體序列的二級結構表明miR-2331-3p的結構最不穩(wěn)定,miR-1296最小自由能的絕對值最大,結構最為穩(wěn)定。用qPCR驗證miR-m13,miR-433-5p,miR-671,miR-1296,miR-345-3p和miR-2331-3p在遼寧絨山羊細型皮膚中的表達量都顯著高于粗型皮膚中的表達量,可能對羊絨細度候選基因發(fā)揮重要的正調控作用,而miR-130b在LCG粗型的表達量高于LCG細型表達量,可能miR-130b對羊絨細度相關候選基因起負調控作用。