摘要：目的:研究lncRNA GABPB1-AS1調(diào)控氧化應(yīng)激適應(yīng)性線粒體生成的關(guān)鍵調(diào)控因子PGC-1α和GABPB1的活化的作用機(jī)理。方法:人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)以200 μM的H2O2刺激3h構(gòu)建氧化應(yīng)激細(xì)胞模型,去除H2O2后繼續(xù)培養(yǎng),檢測(cè)GABPB1-AS1在細(xì)胞應(yīng)激后階段的表達(dá)行為及其對(duì)PGC-1α和GABPB1的調(diào)控作用。1)qRT-PCR檢測(cè)GABPB1-AS1和PGC-1α在去除H2O2后2h、4h、8h和16h表達(dá)情況,western bloting(WB)檢測(cè)對(duì)應(yīng)時(shí)段PGC-1α蛋白水平。轉(zhuǎn)染GABPB1-AS1的siRNA和表達(dá)質(zhì)粒,WB檢測(cè)其對(duì)PGC-1α蛋白水平的影響。Tagertscan數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)miR-101與GABPB1-AS1和PGC-1α的結(jié)合關(guān)系,RNA pull down檢測(cè)GABPB1-AS1對(duì)miR-101的親和吸附作用,轉(zhuǎn)染miR-101的mimic和inhibitor,WB檢測(cè)其對(duì)PGC-1α蛋白水平的影響;2)qRT-PCR檢測(cè)GABPB1-AS1和GABPB1在去除H2O2后2h、4h、8h、16和24h表達(dá)情況,WB檢測(cè)對(duì)應(yīng)時(shí)段GABPB1蛋白水平及過表達(dá)GABPB1-AS1后GABPB1蛋白水平。NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)并用RNA pull down和RNAprotection assay(RPA)驗(yàn)證GABPB1-AS1與GABPB1序列重疊位點(diǎn)、親和吸附作用及其生理意義。結(jié)果:1)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)高表達(dá)的GABPB1-AS1在去除H2O2后逐漸降低至基線水平,對(duì)應(yīng)時(shí)段PGC-1α蛋白水平顯著增高;敲低和過表達(dá)GABPB1-AS1可以分別抑制和上調(diào)PGC-1α蛋白水平;miR-101在GABPB1-AS1和PGC-1α的3’UTR上均有結(jié)合位點(diǎn),RNA pull down證明GABPB1-AS1親和結(jié)合miR-101,過表達(dá)和敲除miR-101分別抑制和上調(diào)PGC-1α蛋白水平;2)氧化應(yīng)激作用誘導(dǎo)GABPB1-AS1與GABPB1協(xié)同表達(dá),而GABPB1蛋白變化則呈“U”曲線,過表達(dá)GABPB1-AS1下調(diào)GABPB1 mRNA及蛋白水平,GABPB1-AS1與GABPB1 mRNA的前端1~449 nt序列互補(bǔ),RNA pull down和RPA實(shí)驗(yàn)證實(shí)二者在1~447 nt互補(bǔ)結(jié)合形成重疊二聚體結(jié)構(gòu),并保持GABPB1 mRNA穩(wěn)定。結(jié)論:氧化應(yīng)激誘導(dǎo)高表達(dá)的LncRNA GABPB1-AS1在應(yīng)激適應(yīng)階段通過GABPB1-AS1/miR-101/PGC-1α軸,上調(diào)PGC-1α蛋白水平,促進(jìn)應(yīng)激適應(yīng)性線粒體生成,GABPB1-AS1作為核質(zhì)互作信號(hào)分子參與氧化?