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摘要：環(huán)氧化物水解酶能夠?qū)ν庀h(huán)氧化物進行動力學(xué)拆分保留單構(gòu)型的環(huán)氧化物。測定了菜豆環(huán)氧化物水解酶(PvEH1)針對苯基縮水甘油醚及其甲基衍生物的催化特性,并基于分子對接及多序列比對分析確定7個突變位點,通過單點和組合突變對PvEH1進行改造,以期改善PvEH1對鄰甲基苯基縮水甘油醚(1a)的催化特性。底物譜分析表明PvEH1對1a的催化活性(157.2U/g濕細胞)和對映選擇性(E=5.6)最高。單點突變結(jié)果顯示E.coli/pveh1 L105I和E.coli/pveh1^V106I對1a的催化活性和對映選擇性均有明顯提高;L105I和V106I位組合突變菌株E.coli/pveh1^L105I/V106I的催化活性(493.8U/g濕細胞)是E.coli/pveh1的3.1倍,對映選擇性(E=8.3)也提高至E.coli/pveh1的1.5倍。純化后PvEH1 L105I/V106I的催化活性為17.6U/mg,是PvEH1的1.5倍,對1a的催化效率提高至PvEH1的2.1倍。SDS-PAGE分析表明提高了蛋白質(zhì)的可溶性表達量。利用E.coli/pveh1^L105I/V106I全細胞催化100mmol/L 1a水解動力學(xué)拆分獲得手性純(R)-1a (ee>96%)的產(chǎn)率和時空產(chǎn)率分別為31.2%和5.12g/(L·h),因此,在手性純(R)-1a的制備中,E.coli/pveh1^L105I/V106I是一種頗具潛力的生物催化劑。