摘要：目的:通過研究miR-17-5p對自噬相關(guān)基因ATG7的靶向調(diào)控機制和對細(xì)胞自噬的作用,探究miR-17-5p在結(jié)核分枝桿菌介導(dǎo)的自噬途徑中的作用及其機制。方法:生物信息學(xué)分析得到miR17-5p的靶基因ATG7,通過成功構(gòu)建載體ATG7野生型(pMirGLO-ATG7-3'UTR-WT)和突變型,利用雙螢光素酶報告系統(tǒng)、Western blot驗證miR-17-5p和ATG7的靶向關(guān)系,同時構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌(H37Ra)感染的人源性THP-1巨噬細(xì)胞模型,將做不同處理的細(xì)胞分為三組:miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor、miR-17-5p nc。通過實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)檢測H37Ra感染對miR-17-5p表達量的影響,并且進一步通過Western blot、免疫熒光觀察檢測LC3蛋白的表達量和自噬小體的數(shù)量。結(jié)果: MTB感染能夠引起miR-17-5p的下調(diào),隨著感染復(fù)數(shù)的增加有明顯的降低。而生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果顯示miR-17-5p與ATG7具有靶向性,雙螢光素酶報告實驗、Western blot驗證miR-17-5p能夠和ATG7靶向結(jié)合,并對其進行負(fù)調(diào)控。進一步通過Western blot、免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)miR-17-5p mimics組LC3Ⅱ的表達下調(diào),自噬小體表達降低,而miR-17-5p inhibitor組相反。其中對H37Ra感染組與未感染組之間比較,ATG7和LC3Ⅱ蛋白表達明顯增強。結(jié)論: miR-17-5p直接靶向結(jié)合ATG7 3'UTR抑制自噬,在巨噬細(xì)胞抗MTB過程中發(fā)揮作用。