摘要：為建立檢測(cè)藍(lán)舌病病毒(BTV)和流行性出血病病毒(EHDV)的快速診斷方法,筆者根據(jù)BTV的第10基因節(jié)段(Seg-10)和EHDV的第5基因節(jié)段(Seg-5)序列,分別設(shè)計(jì)BTV與EHDV的特異性引物和TaqMan探針,經(jīng)過反應(yīng)條件優(yōu)化,建立了同時(shí)檢測(cè)兩種病毒的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法,并進(jìn)行了特異性、靈敏度、重復(fù)性和臨床樣品檢測(cè)驗(yàn)證。用該方法對(duì)BTV Seg-10和EHDV Seg-5節(jié)段的體外轉(zhuǎn)錄ssRNA為模板繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)(R~2)均大于0.995,線性關(guān)系較好;該方法可檢測(cè)不同血清型的BTV和EHDV,與阿卡斑病病毒(AKAV)、中山病病毒(CHUV)、小反芻獸疫病毒(PPRV)、口蹄疫病毒(FMDV)和牛流行熱病毒(BEFV)無交叉反應(yīng),表明該方法特異性強(qiáng);對(duì)2種標(biāo)準(zhǔn)品的檢出極限均為10 copies/uL,比常規(guī)RT-PCR敏感性高10倍;組內(nèi)和組間重復(fù)試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于2%;用所建立的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法及常規(guī)RT-PCR方法,對(duì)100份血液樣品和50份病毒液分別進(jìn)行檢測(cè),符合率均大于90%。以上結(jié)果表明所建立的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法具有快速、準(zhǔn)確、敏感和穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),為BTV和EHDV感染的早期快速診斷、高通量檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查提供了有效的技術(shù)方法。