摘要：為獲得纖維小體(cellulosome)的基本元件,本試驗(yàn)以灘羊瘤胃液微生物混合DNA為模板,根據(jù)黃色瘤胃球菌纖維小體的腳手架蛋白ScaC基因序列(GenBank登錄號(hào):JN109634.1)設(shè)計(jì)特異性引物,擴(kuò)增纖維小體腳手架蛋白基因,并對(duì)其進(jìn)行克隆、測(cè)序及核苷酸和氨基酸序列分析;同時(shí)構(gòu)建腳手架蛋白基因原核表達(dá)載體,分析其在大腸桿菌中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,試驗(yàn)利用1對(duì)引物同時(shí)成功克隆獲得2個(gè)腳手架蛋白編碼基因,其中一個(gè)基因全長(zhǎng)867bp,編碼288個(gè)氨基酸,命名為ScaC2基因;另一個(gè)基因全長(zhǎng)870bp,編碼289個(gè)氨基酸,命名為ScaC7基因。核苷酸序列分析表明,腳手架蛋白基因ScaC2與ScaC7的核苷酸序列相似性為74.1%,ScaC2基因與黃色瘤胃球菌AGY80P318及ScaC7基因與黃色瘤胃球菌DA640P037ScaC基因核苷酸序列相似性均為99%;氨基酸保守序列分析顯示,ScaC2和ScaC7氨基酸序列均具有典型的腳手架蛋白結(jié)構(gòu)域,含有1個(gè)Ⅰ型黏附域和1個(gè)Ⅰ型錨定域。蛋白表達(dá)分析顯示,ScaC2和ScaC7基因均能在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物大小約為33ku。本試驗(yàn)克隆獲得的纖維小體的腳手架蛋白基因ScaC2和ScaC7可為后續(xù)人工纖維小體的構(gòu)建提供基本材料。