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轉(zhuǎn)染白細(xì)胞介素1受體拮抗劑與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1軟骨細(xì)胞和致炎軟骨塊共培養(yǎng)后炎性因子的變化

作者:張平; 劉斌; 蔡道章; 鐘志宏; 潘永謙; 張振山 廣州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院骨外科; 510150; 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院骨外科

摘要:目的 觀察重組人白細(xì)胞介素1受體拮抗劑(IL-1Ra)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)雙基因在體外對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎(OA)的治療效果.方法 取新西蘭大白兔關(guān)節(jié)軟骨經(jīng)酶消化分離原代培養(yǎng)軟骨細(xì)胞,并采用特異性細(xì)胞外基質(zhì)Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞染色進(jìn)行鑒定.軟骨細(xì)胞分為轉(zhuǎn)染IL-1Ra組(A組)、轉(zhuǎn)染TGF-β1組(B組)、轉(zhuǎn)染IL-1Ra+TGF-β1雙基因組(C組)、未轉(zhuǎn)染組(D組)、空白組(E組).A、B、C 3組均以LipofectamineTM 2000 Reagent脂質(zhì)體為轉(zhuǎn)染媒介.各組加入軟骨塊與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng),除E組外,其余各組均加入20 ng IL-1β,轉(zhuǎn)染共培養(yǎng)后分別在12、24 h、2、4、6 d通過(guò)熒光顯微鏡觀察軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)基因的表達(dá).于共培養(yǎng)第2,4、6天后應(yīng)用放射免疫分析(RIA)分別檢測(cè)各組IL-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量.結(jié)果 成功分離培養(yǎng)軟骨細(xì)胞,Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞染色顯示細(xì)胞胞質(zhì)染成棕黃色.胞核基本不著色.熒光顯微鏡下A、B、C組均有綠色熒光蛋白的表達(dá),轉(zhuǎn)染后24 h,3組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率最高分別為(16.16+2.71)%、(16.54±2.91)%、(17.20±2.39)%,第2天后隨時(shí)間的延長(zhǎng)轉(zhuǎn)染率逐漸降低.同時(shí)間點(diǎn)IL-1β水平D組>B組>A組>C組>E組;而第2、6天TNF-α水平D組>A組>B組>C組>E組,第4天E組>A組>B組>C組>D組,其中A組雖然略高于B組,但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.A、B、C組的IL-1β和TNF-α在第6天的水平明顯低于第2、4天,D、E組IL-1β水平不隨時(shí)間的延長(zhǎng)而改變,TNF-α水平D組在第4天時(shí)最低,E組則最高.結(jié)論 轉(zhuǎn)染IL-1Ra和TGF-β1基因均有降低炎性因子水平的作用.聯(lián)合應(yīng)用轉(zhuǎn)染IL-1Ra和TGF-β1基因可能控制炎性反應(yīng),為體外OA的基因治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).

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