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Survivin mRNA轉(zhuǎn)染樹(shù)突細(xì)胞誘導(dǎo)特異性抗胰腺癌免疫反應(yīng)的體外研究

作者:郭曉鐘 陳江 沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院消化科 110016

摘要:目的研究人胰腺癌survivin mRNA轉(zhuǎn)染樹(shù)突細(xì)胞(DC)誘導(dǎo)的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng),為DC疫苗治療胰腺癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法自樣本外周血單核細(xì)胞中分離和培養(yǎng)DC。體外轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增survivin mRNA后使用電穿孔法將其轉(zhuǎn)染DC。采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)DC中survivin的表達(dá)。用四甲基偶氮苯唑鹽(MTT)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后DC存活率變化。采用^51Cr標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染survivin mRNADC誘導(dǎo)的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)。使用γ-干擾素(IFN—γ)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)轉(zhuǎn)染survivin mRNADC誘導(dǎo)的CTL活化反應(yīng)。結(jié)果survivin mRNA轉(zhuǎn)染后48hDC中survivin mRNA表達(dá)水平最高(46.09±6.57)。轉(zhuǎn)染后DC存活率穩(wěn)定在80%左右。轉(zhuǎn)染survivinmRNADC可有效誘導(dǎo)HLA-A2^+/survivin^+特異性CTL免疫反應(yīng)。胰腺癌Capan-2細(xì)胞與對(duì)照組SCL-1細(xì)胞刺激survivin特異性CTL的24hIFN-7釋放量分別為(28.79土5.70和(25.12±2.13)U/ml,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.761)。結(jié)論人胰腺癌survivin mRNA體外轉(zhuǎn)染DC可誘導(dǎo)CTL產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫。

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