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甘蔗NAD(P)H脫氫酶復(fù)合體O亞基基因克隆及其與甘蔗花葉病毒VPg互作

作者:翟玉山; 趙賀; 張海; 鄧宇晴; 程光遠(yuǎn); 楊宗桃; 王彤; 彭磊; 徐倩; 董萌; 徐景升 福建農(nóng)林大學(xué)國家甘蔗工程技術(shù)研究中心/農(nóng)業(yè)部福建甘蔗生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/教育部作物遺傳育種與綜合利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 福建福州350002

摘要:NAD(P)H脫氫酶(NDH)復(fù)合體介導(dǎo)循環(huán)電子傳遞,對于維持葉綠體高效的光合作用具有重要作用。甘蔗(Saccharum spp. hybrid)中NDH復(fù)合體應(yīng)答及參與甘蔗花葉病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)的侵染尚未見報(bào)道。本研究克隆了甘蔗NDH復(fù)合體的O亞基,命名為ScNdhO,其開放讀碼框(open reading frame,ORF)長度為471 bp,編碼長度為156 aa的蛋白。生物信息學(xué)分析表明,ScNdhO為穩(wěn)定的親水性蛋白,不存在信號(hào)肽,無跨膜結(jié)構(gòu)域;蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)元件多為無規(guī)則卷曲,具有典型的NDH復(fù)合體O亞基結(jié)構(gòu)域;系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,該蛋白屬于NDH復(fù)合體O亞基蛋白家族。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR分析發(fā)現(xiàn),ScNdhO基因的表達(dá)具有明顯的組織特異性,在成熟甘蔗葉片中的表達(dá)量最高,在莖中的表達(dá)量最低,在根中幾乎不表達(dá);ScNdhO基因在SCMV侵染早期上調(diào)表達(dá),后期下調(diào)表達(dá)。亞細(xì)胞定位分析表明,ScNdhO定位于葉綠體。酵母雙雜交(yeast two hybrid,Y2H)和雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)實(shí)驗(yàn)表明,ScNdhO與SCMV-VPg互作。推測ScNdhO被SCMV選擇性利用,可能參與SCMV基因組復(fù)制及花葉病癥狀的產(chǎn)生。

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